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人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒厂家

更新时间:2019-07-15

简要描述:

人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒厂家产品特点
1、灵敏度高:可检测浓度低于1.0pg/ml的细胞因子含量,结果可靠;
2、样本量少:检测样本只需50ul,是珍贵样本检测的理想选择; 3、操作简便:操作流程简单明确,且试剂盒包括实验所有必需试剂; 4、设备简单

人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒厂家

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠凋亡诱导因子(AIF)的含量。

有效期:6个月

Elisa试剂盒保存条件:2-8℃

Elisa试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断

 

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠凋亡诱导因子(AIF)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠凋亡诱导因子(AIF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 

样本处理及要求

1.  血清:全血标本请于室温放置2小时或4过一夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20或-80保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20或-80保存,但应避免反复冻融。

3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20或-80保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。


标本处理

1.  本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。

2.  实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。

3.  若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。

4.  使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

5.  若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。

6.  某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。

7.  建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。

 

需要而未提供的试剂和器材

  • 酶标仪(450nm)
  • 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37恒温箱
  • 蒸馏水或去离子水

人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒厂家

 

elisa试剂盒组成

试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

8孔×12

8孔×6

标准品

0.3mL*6

0.3mL*6

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

1.  标准品浓度依次为:80、40、20、10、5、0 ng/mL

2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过zui大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

人ELISA试剂盒操作步骤

实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。

用于检测未知抗体的间接法:

用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。

   ↓

加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)

   ↓

于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,   37℃孵育30-60分钟,洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。

   ↓

加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

     

终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

     

结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

 

 

 标签:elisa试剂盒生产厂家直销

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