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gibco澳洲胎牛血清货号:10099-133 现货

更新时间:2019-07-17

简要描述:

gibco澳洲胎牛血清货号:10099-133 现货
上海琛艺实业有限公司主营品牌:BI品牌,Gibco品牌, Bovogen品牌,hyclone品牌,ATCC品牌,Sigma品牌,abcam品牌,CST品牌,PAA品牌,PAN品牌。
主营:进口胎牛血清,gibco10099-141胎牛血清,gibco10091-148胎牛血清,gibco10270-106胎牛血清,小牛血清,胰酶,双抗,

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Gibco胎牛血清使用方法

   在细胞培养过程中,经常加入5%-20%的Gibco胎牛血清,较常使用的Gibco胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱,影响后续实验的结果,我们在实验中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培养293T细胞,效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清,要根据具体细胞选择合适的Gibco胎牛血清浓度。

Gibco胎牛血清保存方法

1、需要长期保存的Gibco牛血清,例如Gibco南美胎牛血清,必须储存于-20 - 70 低温冰箱中。4冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏,而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可将40~45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现Gibco牛血清有悬浮物,例如Gibco北美胎牛血清中发现有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。

3、瓶装Gibco胎牛血清南美解冻需采用逐步解冻法:-20 至 -70 低温冰箱中的血清放入4冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20进入37解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

4、热灭活是指56, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物和絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

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Gibco胎牛血清使用中遇到的常见问题总结

一、血清灭活问题。

 

1、问:加到培养基中的血清必须灭活吗?

 

答:不是必须的,看做什么实验了,我在使用Gibco南美血清10270106的时候,都不灭活。

 

2、问:Gibco胎牛血清新西兰(Gibco新西兰血清10091148)灭活是56 30分钟吗?

 

答:如果用于培养大多数的肿瘤细胞,血清一般是不需要灭活的,例如经常使用Gibco新西兰胎牛血清,是不用热灭活的,这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞,如内皮细胞,血清是需要灭活,一般是56,30min。

 

3、问:我要做滋养细胞培养,Gibco北美胎牛血清要灭活吗?

 

答:一般的细胞培养中使用到的Gibco胎牛血清,例如Gibco ES胎牛血清是不用灭活的。如果一定需要灭活,可以直接购买Gibco胎牛血清澳洲热版本,进口Gibco澳洲胎牛血清热灭活的一般都已灭活。灭活的Gibco血清价格一般比未灭活的Gibco血清价格要高很多。

 

4、问:我用病毒上清转染细胞,培养用的血清需要灭活吗?因为血清中可能有些补体和抗体,是不是会影响转染?我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合,影响转染,正确吗?细胞是单核细胞白血病细胞,病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时,目的是什么?

 

答:血清一定要灭活,可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰,一般是2-6小时,根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活,灭活的目的是将血清中的补体灭活!这要根据实际情况而定,如果没有把握那就灭活吧,也不麻烦56度半个小时。

 

5、问:(1)我买的是Gibco胎牛血清北美,要灭活吗?有些说法是需要,有些说直接解冻后就可以加入到培养基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有关系吗?

 

答:关于血清的热灭活,是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行,因为有两个作用,*是灭活补体,第二是灭活血清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。

 

我在实验室处理Gibco胎牛血清新西兰的时候,有一次水浴箱在灭活过程中出现故障,温度升高到80,血清变成了凝胶状,我重新处理了另外一份Gibco胎牛血清南美,将两份血清对比,发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56下灭活半小时以上,肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试,看看到底有多大的影响。热灭活之后,血清放在四度冰箱久了,就会有沉淀产生,这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到底有没有污染,常常又会把血清放置37温育,但是血清中的蛋白会进一步析出,后还是要做镜检,无菌培养试验,和革兰氏染色试验,非常麻烦。

 

我看过一份资料,里面提到70%的实验者认为灭活是理所当然的。常规灭活建议的温度在45到62之间,而时间则从15分钟到60分钟不等。其中较常用的手法是56热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高,许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效性和必要性。有人比较过11个不同细胞株,发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纤维细胞,MRC-5)的生长带来负面影响,三个细胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响,而只有两个细胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在热灭活之后,细胞生长有轻微的改善。所以,在正常的操作下,热灭活通常对细胞的生长没有明显的促进作用。

 

你可以摸索一下,Gibco北美血清16000044从-20冰箱拿出来之后在常温解冻,然后混匀分装成两份,一份灭活,一份不灭活,比较这两种Gibco北美血清对细胞是否有影响。然后再确定是灭活还是不灭活。这个过程多也就一个星期。同时你还要考虑血清灭活与否对你后续的实验有没有影响。

 

问:(2)分装后的Gibco澳洲血清10099141血清从-20取出放4让其液化,却见Gibco澳洲血清10099141血清比较混浊,有沉淀产生,这属正常吗?

 

答:正常。

 

上海琛艺实业常备原装进口gibco胎牛血清;以及bi胎牛血清:GIBCO 10099-141;GIBCO16000-044;GIBCO10091-148;gibco10270-106等,Hyclone胎牛血清 HycloneSV30087.01.;Hyclone SV30087.02;HycloneSH30068.03;

HycloneSH30406.01等。。。

 

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