人可溶性血管内皮生长因子受体2ELISA试剂盒

 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人幽门螺旋杆菌IgG(Hp-IgG)的含量。

  有效期：6个月

 保存条件：2-8℃

人可溶性血管内皮生长因子受体2ELISA试剂盒性能:

 1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
 2．灵敏度：zui低检测浓度小于10 pg/ml。
 3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
 4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人幽门螺旋杆菌IgG(Hp-IgG)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人幽门螺旋杆菌IgG(Hp-IgG)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

人可溶性血管内皮生长因子受体2ELISA试剂盒原理性能:

 1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
 2．灵敏度：zui低检测浓度小于10 pg/ml。
 3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
 4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材

1.     酶标仪（450nm）

2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒温箱

4.     蒸馏水或去离子水

 ELISA试剂盒试剂准备

在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备zui为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。

人可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR-2)ELISA试剂盒原理性能:

 1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
 2．灵敏度：zui低检测浓度小于10 pg/ml。
 3．特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
 4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
ELISA试剂盒问题解析：

1.试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。

2.加样中可能遇到的问题：在做血清或是血浆用于检测试剂的时候，会碰到血清血浆不好分离的情况，这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时，然后在进行离心处理

3.洗板时容易造成误差： 因为洗板是人工洗的，所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的，这个时候带有主观色彩，所以多清洗几次，还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动

4.显色问题： 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长，都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候，要先查看显色剂本身的情况

5.终止反应：在加终止剂的时候由于倾倒速度快，差生气泡，造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒

6.读板：读板的时候首先应该保证板的清洁干净

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

ELISA试剂盒操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

1.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

2.  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

注释：本公司所有产品仅用于科研，不得用于临床。