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U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤STR鉴定

更新时间:2019-08-03

简要描述:

U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤STR鉴定
•售前
上海琛艺专业为国内科研提供高品质细胞和优质服务,QC检测合格后发货保证细胞状态良好,发货前保证质量。
二、售后收到细胞7天内出现状态不佳等情况请及时反馈,会有技术同步指导操作协助解决,如仍未养活免费重发。建议及时保种,有备无患!

产品名称

U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤STR鉴定说明书

英文名称

RL95-2 (human endometrial cancer cells)

规格 

5×106cells/瓶×2

U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤STR鉴定订购流程:
根据自己需要向我司说明来意;
签订协议并支付货款下单;
厂家下单并包邮送货上门;订购流程:
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厂家下单并包邮送货上门;

U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤STR鉴定功能:
(1)       血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
(2)       表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1,参与血管壁的炎症反应。
(3)       与血管疾病的进展和稳定有关。
 生理变化:
(1)       主动脉硬化。
(2)       主动脉瘤
(3)       主动脉钙化。
基本特性:
(1)       组织来源于正常大鼠大动脉组织。
(2)       鉴定:肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。
(3)       原代细胞培养末期液氮冻存。
(4)       每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(5)       肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。
(6)       不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤STR鉴定运输和保存:
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。 
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线

 

细胞系使用说明书

种属

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁  上皮样

培养条件

培养基:DMEM+10%FBS (推荐HAKATA优等胎牛血清,货号:HN-FBS-50)

温度:37℃     气相:95%空气,5% CO2

传代

1. 用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液;

2.待细胞长至80-90%时,需要对其进行传代,推荐传代比例为1:3至1:5 ;

3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(*次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心5min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。

保存

冻存条件:80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注:建议使用本公司的冷冻液(H-W-100),用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)

3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。

 

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