人醛固酮（ALD）ELISA试剂盒操作步骤

人醛固酮(ALD)ELISA试剂盒操作步骤

人elisa试剂盒中标本血清的解决方法

 血清是zui常用的人ELISA试剂盒标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种,本文主要为大家介绍内源性物质：
    内源性物质： 有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
（1）类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与人ELISA试剂盒系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。
解决该情况的办法是：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。
（2）补体 ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，人ELISA试剂盒抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，人ELISA试剂盒从而造成假阳性。解决的办法是：①用EDTA稀释标本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。
（3）嗜异性抗体 人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ，但加入量不足或亚类不同时无效。
（4）嗜靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在人ELISA试剂盒方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，测定前需用理化方法将其解离后再测定。

人醛固酮(ALD)ELISA试剂盒操作步骤适用于科研实验、科学研究等领域，不得用于临床诊断。上海琛艺ELISA试剂盒的特点是灵敏性高、特异性强、重复性好！

【说 明 书】：随货发送，也可直接在线咨询本司销售人员

【测试种属】：犬、大小鼠、人、豚鼠、兔子、牛羊、猪、鸡鸭elisa试剂盒等种属
【检测目的】：用于测定血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本.
【储存方式】：2-8℃
【产品产地】：进口/国产
【产品库存】：现货供应
【产品规格】：48T/96T
96T可以测85个样10个标准孔1个空白对照、48T可以测37个样10个标准孔1个空白对照。

人ELISA试剂盒试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

人ELISA试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

人ELISA试剂盒局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

人ELISA试剂盒试剂盒性能
1. 灵敏度：小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

人ELISA试剂盒结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

elisa试剂盒的组成： 

（1）结合物及标本的稀释液；
（2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（4）酶的底物；
（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；
（6）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）
用途：科研与实验试剂，不得用于临床诊断。
检测种属：人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。
标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。 
  

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