更新时间：2023-05-09
【中文名称】IEC-6-GFP大鼠小肠引窝上皮细胞-含STR鉴定【背景资料】 见细胞说明书【产品来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系“公司提供贴壁、半贴壁、悬浮、半悬浮、贴壁与悬浮混合等细胞特性，一般细胞培养FBS量是10%
| 品牌 | 自营品牌 | 货号 | IEC-6-GFP |
|---|---|---|---|
| 规格 | T25瓶 | 供货周期 | 现货 |
| 主要用途 | IEC-6-GFP细胞大学与医院科研 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,石油 |
上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株，其中人的已通过STR鉴定的有几百株，欢迎各位选购。。。。。。
细胞名称：IEC-6-GFP大鼠小肠引窝上皮细胞-含STR鉴定
培养条件：DMEM +10% FBS
形 态：贴壁；上皮细胞样
“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。
formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
IEC-6-GFP大鼠小肠引窝上皮细胞-含STR鉴定培养说明书
组份 | 数目 |
细胞 | 1 T-25瓶 |
细胞说明书 | 一份 |
生长特性： | 贴壁生长
|
细胞来源： | 从ATCC/中科院/协和医院等地引进 |
培养条件： | 培养基：F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS（推荐德国SERANA S-FBS-SA-015优等胎牛血清） 气相：空气95%，二氧化碳5% 温度：37℃ |
培养： |
1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代； 2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，*次传代比例为1:2。 3传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入1mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（*次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*消化时间，记录*消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。
二、悬浮细胞 1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒，然后置于无菌操作台，打开瓶口，轻轻吹打后，将其中的细胞悬液转移到离心管中，然后1200rpm离心3min，去上清； 2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鲜培养基，然后将其置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液（离心后去旧液，加入新鲜培养基）； 3.显微镜观察细胞数目比较多时，对其进行传代，*次传代比例为1:2（离心后平均分成两瓶培养）。
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细胞总数： | 1~3*106 |
传代周期： | 2-3天 |
传代比例： | 1:2~1:4 |
换液频率： | 2-3天 |
冻存液： | 90%FBS+10%DMSO |
目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由冰晶形成的细胞损伤。
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。
2、取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
3、离心1000 rpm,5 min。
4、去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的zui终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
6、冻存：标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min；当温度达到-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
021-39598508
