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HT-29-LUC人结肠癌细胞-荧光素酶标记

更新时间:2019-08-18

简要描述:

【中文名称】HT-29-LUC人结肠癌细胞-荧光素酶标记
【背景资料】 见细胞说明书
【产品来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
“公司提供贴壁、半贴壁、悬浮、半悬浮、贴壁与悬浮混合等细胞特性,一般细胞培养FBS
量是10%

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株,其中人的已通过STR鉴定的有几百株,欢迎各位选购。。。。。。

细胞名称:HT-29-LUC人结肠癌细胞-荧光素酶标记

培养条件:DMEM +10% FBS

形       态:贴壁;上皮细胞样

“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。

formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光,用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。

HT-29-LUC人结肠癌细胞-荧光素酶标记培养说明书

 

  • 组成:

组份

数目

细胞

 1 T-25瓶

细胞说明书

一份

  • 细胞简介:

生长特性:

贴壁生长

 

细胞来源:

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

培养条件:

培养基:F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS(推荐德国SERANA S-FBS-SA-015优等胎牛血清)

气相:空气95%,二氧化碳5%

温度:37℃

培养:

  • 贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,*次传代比例为1:2。

3传代步骤:将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入1mlPBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(*次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。

 

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,然后置于无菌操作台,打开瓶口,轻轻吹打后,将其中的细胞悬液转移到离心管中,然后1200rpm离心3min,去上清;

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鲜培养基,然后将其置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液(离心后去旧液,加入新鲜培养基);

3.显微镜观察细胞数目比较多时,对其进行传代,*次传代比例为1:2(离心后平均分成两瓶培养)。

 

细胞总数:

1~3*106

传代周期:

2-3天

传代比例:

1:2~1:4

换液频率:

2-3天

冻存液:

90%FBS+10%DMSO

细胞培养过程中血清的要求:

一、无血清培养基的基本配方:基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。 
    用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时,多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长;而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时,由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白,细胞往往以悬浮形式生长。 
添加组分包括以下几大类物质
(1)促贴壁物质:许多细胞必须贴壁才能生长,这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子,一般为细胞外基质,如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子,对许多细胞的繁殖和分化,起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化,这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。 
(2)促生长因子及激素:针对不同细胞添加不同的生长因子。激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质,有些激素是许多细胞必不可少的,如胰岛素。 
(3)酶抑制剂:培养贴壁生长的细胞,需要用胰酶消化传代,在无血清培养基中必不可少须含酶抑制剂,以终止酶的消化作用,达到保护细胞的目的。zui常用的是大豆胰酶;抑制剂。 
(4)结合蛋白和转运蛋白:常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比较大,可增加培养基的粘度,保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。 
(5)微量元素:硒是zui常见的。 
二、使用方法:目前,血清仍是动物细胞培养中zui基本的的添加物,尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛以后,再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。细胞转入无血清培养之前,要留有种子细胞,种子细胞按常规培养于含血清的培养基中,以保证细胞的特性不发生变化。 
为了使细胞适应无血清培养,关键的是使所培养细胞: 
●处于对数生长中期 
●>90% 活细胞率 
●适应时以较高的起始细胞接种 

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