人补体调节蛋白（CCP）ELISA试剂盒说明书

 上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA试剂盒研发的种属涵盖：人，大鼠，小鼠，猪，牛，羊，兔，植物，农残类，鱼类等。具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技术，结合公司的研发团队，可以有效的保证公司产品强的稳定性和高的准确性，同时又具有竞争力的价格。公司目前主要提供生化试剂、分子生物学试剂及试剂盒，各种抗体及免疫学试剂盒、实验耗材等多门类上万种产品，产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。

中文名称：人补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒说明书

英文名称：human Folic acid,FA ELISA kit

规格：96T/48T

品牌：琛艺酶科

种属：人ELISA试剂盒

检测波长:450nm

所需样本体积：50-100ul

适用范围：仅供科研

库存：现货

保存及有效期:2-8℃,六个月

检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。

例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑斧液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

琛艺供应的种属有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELSA试剂盒等

上海琛艺实业长期代做人、大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、猪、鸡、犬、猴子、羊、牛等种属elisa实验。

人补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒说明书

ELISA试剂盒组成成分：

ELISA试剂盒自备材料

1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。

ELISA试剂盒安全性
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

ELISA试剂盒操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应*，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

ELISA试剂盒试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

ELISA试剂盒操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

ELISA检测试剂盒常见问题及解决建议

Q1 称样时，样品是放在管底还是管口，如果放在管口对检测结果有什么影响？

答：称量过程中，样本应尽量称量在试管底部，若样本粘附在试管口，会使提取液不能与样本充分接触，造成提取不充分，从而影响检测结果。

Q2 是否可以将样本提前称量至离心管放置冰箱冷藏保存，待第二天实验使用？
答：建议冷冻保存，并注意避免交叉污染。
Q3吸取有机试剂时，有机试剂容易从枪头滴落，如何避免？
答：吸取有机试剂应使用刻度吸管或瓶口分液器。使用移液器吸取有机试剂会导致移液器的损坏，且吸取量不准确。饱和蒸气压越大的液体（易挥发液体）越容易出现液滴低落的现象，若必须使用移液器吸取，可将枪头与移液器紧密连接，减轻滴落现象的发生。
Q4 前处理时，样本离心5分钟和离心10分钟有什么区别？
答：样本前处理的目的是去除杂质以达到试剂盒能够检测的状态，离心是去除杂质的一种手段。离心可以分离液-液，液-固等非均一体系，离心的效果与需要分离的两相性质有很大关系：若固体样本的颗粒较小不易分离，则离心所需时间较长；若液体样本与提取液极性相差较大且不易发生乳化，则离心所需时间较短。试剂盒说明书中提到的离心时间是经过大量实验验证所得到的，建议按照说明书操作。
Q5 离心转速和离心力有什么区别？
答：离心转速有相对离心力（RFC，单位g）和每分钟转速（rpm，单位r/min）两种表达方式，两者换算公式为RFC=1.118*10-6*（rpm）2*r，其中r为旋转半径。维德维康试剂盒实验过程中使用的离心力为4000g，应避免与4000r/min混淆。
Q6 药物残留检测实验中对水质的要求：三蒸水、蒸馏水、纯净水还是去离子水？
答：理论来说这几种水均可满足分析要求，但对于某些项目有一定的区别。建议使用去离子水和三蒸水，蒸馏水和纯净水一般仅用于洗涤液的配置。
Q7 器具污染所造成的原因有哪几种？
答：①检样过程中出现含量较高的阳性样品；
②实验器具没有清洗干净；
③实验人员用药污染或其他外源性污染；
④高浓度标品储备液保存不当造成污染。
建议：易被污染或使用周期较长的实验器具,定期（3-5个月）更新一次。
Q8 同一个样品检测两次，检测值差异较大，可能是由于什么原因导致的？
答：正常情况下,板孔间的变异不会对样本的检测结果造成影响，可能造成此结果的情况有：
①某一实验操作前处理发生污染或失误（称样量、添加样品提取液或有机溶剂的量不准确，涡动离心提取上层清液时混入大量杂质）；
②某一实验检测分析过程出现失误（添加样品的量，酶或抗体的量，添加AB液或终止液的量不准）。
Q9 药残检测时，样品前处理过程中所用氮气可否用压缩空气代替？
答：一般情况下，需要检测的目标物是比较稳定的药物，可以用压缩空气代替氮气。如有特殊药物可能发生氧化影响检测结果，则不可以使用压缩空气，具体药物可向厂家咨询。
Q10 添加回收率实验中添加浓度如何选择？
答：添加回收率是验证整个实验过程准确度的指标之一。添加浓度的选择尽量避免在zui低检测限以内或者超出试剂盒曲线外的浓度，建议参照目标药物在相应样品中的判定限、定量限或曲线中间范围浓度。同时，需根据具体的添加浓度对所用高标进行适当的稀释，保证添加量的准确性。
添加回收的体积公式:V=C*1000M/P
其中:V为添加的高标体积（μl），C为添加的浓度(ppb)，P为高标的浓度(ppb)，M为样本的质量(g)。
Q11 样本的吸光度值为什么会超出曲线上zui大ＯＤ值？
答：①标准品回温时间不够；
②样本中含有非样本基质的物质，如有机溶剂；
③样本复溶液稀释错误或直接用去离子水作为复溶液；
④零标品被污染；
⑤反应时间错误；
样本的抑制率在100%-120%范围内，一般可以初步判断样本为阴性。若大部分样本的抑制率远超过120%，建议咨询或重复实验。
Q12 吹干步骤为什么选择水浴或金属浴?
答：有机溶剂的沸点一般在60-90℃不等，为加快有机试剂的挥发，选择水浴加热或金属浴加热。加热温度应根据待测化合物的性质与提取试剂的沸点来确定，若待测化合物热稳定性好，不易降解或变性，可适当提高氮吹温度。建议使用说明书中给出的温度。
Q13 回收率能否验证实验过程及数据的准确性？
答：一般用质控样品（已知浓度的样品）的实验结果来反映检测的准确性。在没有质控样本对照的情况下，空白样本添加回收率是对操作准确性、操作环境及分析试剂的评价指标之一。因此，回收率也是实验成功与否的一个重要判定依据。
在ELISA检测方法实际应用过程中，回收率只是一个参考指标，其值只要稳定在一定范围内，检测结果即具有参考性。
Q14 同一个样品，*次检测显示强阳性，第二次检测时却显示阴性，什么原因？
答：①点样的过程中出现跳孔；
②板孔出现较大的变异系数；
③样本在前处理过程中被污染；
④样本混合不均匀。
建议出现高阳性样本时应保留该样本液，与重新处理好的样本液一起点样分析。