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KYSE410-LUC人食管癌-荧光素酶标记 STR

更新时间:2019-08-19

简要描述:

【中文名称】KYSE410-LUC人食管癌-荧光素酶标记 STR
【背景资料】 见细胞说明书
【产品来源】 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
“公司提供贴壁、半贴壁、悬浮、半悬浮、贴壁与悬浮混合等细胞特性,一般细胞培养FBS
量是10%

上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司新引进细胞上千株,其中人的已通过STR鉴定的有几百株,欢迎各位选购。。。。。。

细胞名称:KYSE410-LUC人食管癌-荧光素酶标记 STR

培养条件:DMEM +10% FBS

形       态:贴壁;上皮细胞样

“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。

formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光,用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。

KYSE410-LUC人食管癌-荧光素酶标记 STR培养说明书

 

  • 组成:

组份

数目

细胞

 1 T-25瓶

细胞说明书

一份

  • 细胞简介:

生长特性:

贴壁生长

 

细胞来源:

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

培养条件:

培养基:F12K+0.1mg/ml肝素+1%ECGS +10%FBS(推荐德国SERANA S-FBS-SA-015优等胎牛血清)

气相:空气95%,二氧化碳5%

温度:37℃

培养:

  • 贴壁细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行2-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,*次传代比例为1:2。

3传代步骤:将0.25%含EDTA胰酶置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入1mlPBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(*次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。

 

二、悬浮细胞

1.用75%酒精喷洒整个瓶消毒,然后置于无菌操作台,打开瓶口,轻轻吹打后,将其中的细胞悬液转移到离心管中,然后1200rpm离心3min,去上清;

2.将离心好的细胞转移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鲜培养基,然后将其置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液(离心后去旧液,加入新鲜培养基);

3.显微镜观察细胞数目比较多时,对其进行传代,*次传代比例为1:2(离心后平均分成两瓶培养)。

 

细胞总数:

1~3*106

传代周期:

2-3天

传代比例:

1:2~1:4

换液频率:

2-3天

冻存液:

90%FBS+10%DMSO

细胞培养过程中遇到的问题:

1. 为什么培养的细胞要及时传代?
    答:体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性,也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候,它就会停止生长,及时传代后,细胞的生长得以继续。
2.培养液pH下降很快可能原因有哪些?其解决办法是什么?
    答:通常细胞生长得非常快时,pH值通常下降得很快。此时可以及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外,培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3 缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。
       (1)按培养液中NaHCO3 浓度增加或减少培养箱内CO2 浓度,2.0g/L 到3.7g/L 浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。
       (2)改用不依赖CO2培养液。
       (3)松开瓶盖1/4 圈。加HEPES 缓冲液至10 到25mM终浓度。
       (4)在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液。
       (5)如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素除菌。
3.培养液pH对细胞生长的影响?
    答:由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时,需要注意一点:培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
4.购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?
    答:研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。但对于DMSO敏感的细胞,还是复苏细胞时,用离心去除DMSO比较好。
5.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?
    答:研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,原因比较复杂,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳;血清使用错误或血清的品质不佳;解冻过程错误;冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心;悬浮细胞误认为死细胞;培养温度使用错误;细胞置于–80 ℃太久等。建议严格参照ATCC或ECACC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。
6.支原体污染会对细胞培养有何影响?
    答:支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数、代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。

 

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