猪磷酸化细胞外信号调节激酶ELISA试剂盒

l、  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清的含量。

2、 有效期：6个月

3、  保存条件：2-8℃

猪磷酸化细胞外信号调节激酶ELISA试剂盒-elisa实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被γ干扰素(IFNG)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFNG)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

猪ELISA试剂盒样本处理及要求

1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材

1.     酶标仪（450nm）

2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37℃恒温箱

4.     蒸馏水或去离子水

猪磷酸化细胞外信号调节激酶ELISA试剂盒

国产ELISA试剂盒试验科研者们往往对成果zui为重视，而因而忽略了细节问题，但成果取决于细节！

1.疏水性聚脂布作为载体；

2.聚苯乙烯微量板为载体；

3.硝酸纤维膜为载体。

是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反响结合起来的一种微量分析技术。酶符号抗原或抗体以后，既不影响抗原抗体反响的特异性，也不改动酶本身 的活性。由于ELISA试剂盒价格低廉且准确性搞、反响时间短等优点，所以合适大批量的检测，一般常常用于食品安全检测方面。

◆ELISA试剂盒需求遵从的几个细节关键：

1.抗原或抗体能吸附于固相载体外表，并坚持其免疫学活性；

2.抗原或抗体可通过共价键与酶衔接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性；

3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据参加底物的色彩反响来断定是否有免疫反响的存在，并且色彩反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的色彩反响的深浅制作规范曲线并依此计算出不知道样品中抗体或抗原的浓度。

◆国产ELISA试剂盒注意事项：

1、标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反响。保存过久可发作聚合在ELISA中可使本底加深。

2、冻住标本溶解后，蛋白质局部浓缩，散布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠混合，不要在混匀器上激烈震荡。

3、污浊或有沉积的标本应先离心或过滤，弄清后再检测。

4、反复冻融会使蛋白效价下降，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。
 

在 ELISA 检测过程中，抗原和抗体的敏感性以及特异性是决定实验是否成功的关键因素。要求所用抗原纯度高，抗体效价高、亲和力强。 

 ELISA 所用抗原有三个来源：天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。  用于 ELISA 的抗体有多克隆抗体和单克隆抗体。 免疫吸附剂  固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。  将抗原或抗体固相化的过程称为包被（coating）。由于载体的不同，包被的方法也不同。  如以聚苯乙烯 ELISA 板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液（常用pH9.6 的碳酸缓冲液）中，加于 ELISA 板孔中在 4℃过夜，经清洗后即可 应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载体表面有能被此蛋白质*覆盖，其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，后产生非特异性显色而导致本底偏高。在这种情况下，如在包被后再用 1％～5％牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰，这一过程称为封闭（blocking）。 包被好的 ELISA 板在低温可放置一段时间而不失去 其免疫活性  酶和底物  ELISA 中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格低廉、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定，保留其活性部分和催化能力。在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。 

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