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CAOV3细胞|CAOV3人卵巢癌细胞 含STR鉴定

更新时间:2019-09-21

简要描述:

CAOV3细胞|CAOV3人卵巢癌细胞 含STR鉴定
为什么培养的细胞要及时传代?
答:体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性,也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候,它就会停止生长,及时传代后,细胞的生长得以继续。

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产品名称:CAOV3细胞|CAOV3人卵巢癌细胞 含STR鉴定

·         产品编号:CAOV3人卵巢癌细胞 

·         细胞数量: 1*10^6

·         细胞种属: 人源

·         生长特性: 贴壁

·         培养基: DMEM-H

·         形态特征: 成纤维细胞样

·         传代方法: 1:3传代,2-3天传一代

·         培养条件: 胎牛血清至最终浓度为10%。环境:空气,95%;二氧化碳(CO2),5%;温度,37℃

·         细胞描述: 亲本L的亚克隆,是最早建立的连续传代细胞之一,L细胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下网眼状空隙和脂肪组织。APRT+,HPRT+。

·         细胞冻存: 液氮冻存(冻存液基础培养基+20%FBS+10%DMSO)

·         细胞运输: 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25瓶)

CAOV3细胞|CAOV3人卵巢癌细胞 含STR鉴定

形态特性 上皮细胞样  
生长特性 贴壁生长 
特征特性 CHO-HCV-C细胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因,能稳定表达C蛋白,是HCV基础研究的极好摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-C培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS  
传代方法 1:3传代,2-3天传一代 
传代情况 C15 
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS  
细胞周期分为细胞间期和细胞分裂期,细胞间期较长,而细胞分裂期较短。
细胞间期是为细胞分裂的准备时期,表现为细胞增大,营养物质增多。细胞分裂期则是一个细胞由两个细胞分解为一个细胞的过程。
细胞是生命的基本单位,细胞的特殊性决定了个体的特殊性,因此,对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。细胞生物学已经成为当代生物科学中发展较快的一门*学科,是生物、农学、医学、畜牧、水产和许多生物相关专业的一门必修课程。
依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取 10 ml培养基加至 T25或 T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基, 混 合均匀,放入37 °C,5 % CO2 培养箱培养。

注意事项

冻存细胞接收后的处理:

1.干冰运输,收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏;
2.收到细胞后,若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理:

1.收到细胞后,请首先检查培养瓶是否破损或漏液,培养液是否混浊,如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后,在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片,若有贴壁细胞脱落,可收集上清离心,将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理,如果细胞长满90%,可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题,出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

细胞培养方法:

  1. 细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
    ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
    ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
    ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
    ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
    ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
    2、细胞复苏:
    ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
    ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
    3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
    ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
    ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
    ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
  2. 细胞培养具体分析:

  3. 体外培养的细胞可分为原代细胞(primary culture cell)与传代细胞(subculture cell)。原代细胞是指机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养,适应在体外培养下条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。

  4. 分散的细胞悬液在培养瓶中很快(在几十分钟至数小时内)就贴附在瓶壁上,这就称为细胞贴壁。

    分散呈圆球形的细胞一经贴壁就迅速铺展并开始有丝分裂,逐渐形成致密的细胞单层,称为单层细胞(sigle layer cell),这种培养方法称为单层细胞培养。

    对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    如果漂浮的死细胞多,说明细胞有很多老化的,建议每次传代的时候,在用胰酶消化之前,用PBS将细胞漂洗一遍,胰酶消化的时间要把握好,37℃2-3min即可,及时终止反应,否则胰酶消化过度对细胞损伤较大,也会有很多死细胞出现的;吹打细胞的动作要轻柔。

    体外培养的细胞,不论是元代细胞还是传代细胞一般不包吃体内原有的细胞形态。但大体可以分为两种基本形态:成纤维样细胞(fibroblast like cell)与上皮样细胞(epitbelial like cell)。此外还有一些可移动的游走细胞。

    某些传代细胞还可用悬浮方法培养。

    对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    此培养条件比较复杂,悬浮培养的优点是能同时获得大量细胞。

    有什么注意事项?

    容器与反应器 可直接加热 (1)试管 主要用途:①常温或加热条件下,用作少量试剂的反应容器。②收集少量气体和气体的验纯。③盛放少量药品。使用方法及注意事项:①可直接加热,用试管夹夹住距试管口处。②试管的规格有大有小。不加热时,试管内盛放的液体不超过容积的 ,加热时不超过 。③加热前外壁应无水滴;加热后不能骤冷,以防止试管破裂。④加热时,试管口不应对着任何人。给固体加热时,试管要横放,管口略向下倾斜。⑤不能用试管加热熔融NaOH等强碱性物质。 (2)蒸发皿 主要用途:①溶液的蒸发、浓缩、结晶。 ②干燥固体物质。 使用方法及注意事项:①盛液量不超过容积的 。 ②可直接加热,受热后不能骤冷。 ③应使用坩埚钳取放蒸发皿。 (3)坩埚 主要用途:用于固体物质的高温灼烧。 使用方法及注意事项: ①把坩埚放在三脚架上的泥三角上直接加热。 ②取放坩埚时应用坩埚钳。 ③加热后可放在干燥器中或石棉网上冷却。 ④应根据加热物质的性质不同,选用不同材料的坩埚。

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