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TOP10F感受态细胞规格

更新时间:2019-12-04

简要描述:

TOP10F感受态细胞规格
本公司生产的E+ DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到,具有无需繁琐的冰浴、热击程序,简单快速的进行质粒DNA的转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率zui高可达 2×107cfu/μg,-80℃保存 3-5 个月转化效率不发生改变。

TOP10F感受态细胞规格

 产品编号 产品名称规格 价格 
 CY1100 DH5α感受态细胞 20×100 μl 300.00


操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行) 
1 、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 
2 、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30 分钟。 
3 、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒,然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟,注意不要摇动离心管。 
4 、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的SOC 或LB培养基,37℃ 180rpm 振荡培养1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 
5 、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或LB平板,37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul 左右的转化产物涂板;反之,如转化的 DNA总量较少,可取200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的*较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 

●  一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。

TOP10感受态细胞  向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100 μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30 分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 分钟,该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时(160-220 转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

TOP10F感受态细胞规格 将离心管内容物混匀,吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16 小时。
●  涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA 总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项:  
 1、感受态细胞应保存在-70 ℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。  
 2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。  
 3、转化时,转化效率与外源 DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。  
 4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/ 铺板DNA总量。  
 5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到低。 
NMY51 感受态细胞100ul*50操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。

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