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大肠肝菌类感受态细胞XL1-Blue 10×100ul

更新时间:2019-11-21

简要描述:

大肠肝菌类感受态细胞XL1-Blue 10×100ul
公司在感受态细胞的研发方面,实力雄厚,拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类,共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面,拥有了大肠杆菌 电转化感受态细胞和农杆菌电击感受态种类,极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。

货号:CY-6009K
供应商:上海琛艺
数量:1000只
英文名:JM109Chemically Competent Cell
保质期:1年
保存条件:零下80度
规格:20*100ul

大肠肝菌类感受态细胞XL1-Blue 10×100ul

JM109 Chemically Competent Cell
产品规格:

JM10910×100μl
pUC19(control vector)10pg/μl          10μl

JM109感受态细胞基因型:
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqIqZΔM15]
JM109感受态细胞简要说明:
CMbio JM109菌株来源于E.coli K strain,是提取高质量DNA的理想菌株,recA1 和 endA1 的突变有利于克隆DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。携带 hsdR17基因型背景,使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆,蓝白斑筛选实验;JM109感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率可达1×109cfu/μg。
JM109感受态细胞操作说明:

  1. CMbio JM109感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

  1.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
JM109感受态细胞注意事项:

  1.  CMbio 感受态细胞在冰上融化。
  2.  混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
  3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

大肠肝菌类感受态细胞XL1-Blue 10×100ul

操作步骤 (以下操作均按无菌条件的标准进行)

1. 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞 悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。 注意: 一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl, 可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不 要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以 100 μl感受态细胞为例。

2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100 μl的感受态 细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻弹混匀, 在冰浴中静置30 min。

3. 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec,然后快速将 管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 min,该过程不要摇 动离心管。 注意:此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需 十分准确,夏季或室温较高时,可放置5-8 min左右, 如果室温较低,可延长时间至8-15 min左右。条件允 许建议使用42℃热激方法。

4. 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC或LB培养基 (不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min (150 rpm),目的是使质粒上相关的抗性标记基因 表达,使菌体复苏。 5. 将离心管内容物混匀,吸取100 μl已转化的感受 态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂 培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀 涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平 板,37℃培养12-16 h。 注意:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化 的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平 板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200- 300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较 少,可通过离心(4000 rpm, 2 min)后吸除部 分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 (涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转 化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养 板)

注意事项:

  • 感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。
  • 实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA 或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
  • 转化时,转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
  • 转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
  • 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到zui低。

 
 

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